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Elisa试剂盒操作方法及注意事项讲解

发布时间:2021-10-15      点击次数:436
  Elisa试剂盒的操作方法:
 
  1.包被抗体:用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至*适浓度(1~10μg/ml),每凹孔加0.3ml,4℃过夜,或37℃水浴3小时,贮存冰箱。
 
  2.洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温-20)洗3次,每次5分钟。
 
  3.分2组,a组加酶标记抗原和被检抗原Elisa试剂盒混合液0.2ml,b组只加酶标记抗原液0.2ml,37℃作用1~2小时。(混合液可作成不同稀释度)
 
  4.洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温-20)洗3次,每次5分钟。
 
  5.加入0.2 ml底物溶液于每个凹孔(OPD或OT),室温作用30分钟(另作一空白对照,0.4ml底物加0.1ml终止剂)。
 
  6.加终止剂:每凹孔加2M H2SO4或2M柠檬酸0.05ml。
 
  7.用酶标比色计测定a、b两组OD值,并求出a、b、OD值的差数。
 
  Elisa试剂盒的注意事项:
 
  1.干冰是固体二氧化碳,温度为零下78℃,湿冰就是冰的温度,一般为冷冻条件的温度,如在零下20℃冷冻的冰的温度为零下20℃。对于一些酶类等蛋白产品,需要干冰运输,其他大多数生化试剂采用湿冰即可;
 
  2.运输常温试剂的时候,不需要冰。对于需要冷藏的试剂,在用冰运输的时候,要把试剂同冰之间有隔离物,不能直接接触试剂包装,如试剂外面加装盒子,在盒子外面加冰,基本都采用冰块,不能直接用水结成的冰,因为冰融化后会形成水,容易污染试剂。加冰块的量没有严格限制,以试剂Elisa试剂盒四周都处于冰块包围为宜;
 
  3.不要小看生物试剂的量,很多抗体类试剂、酶类试剂是很贵的,可以达到上千元/mg(即每公斤几百,上千万元),其保存条件也是很严格的,否则容易失去活性。运输的时候建议使用冰块,而非碎冰,
 
  主要原因:(1)碎冰的温度高,而冰块的温度更低;
 
  (2)冰块可以更长时间的保持低温;
 
  (3)碎冰容易化成水。
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